查看犬内脏血管肉瘤中的肿瘤相关巨噬细胞的源代码

== 讨论 ==

我们发现，CD206-/CD204阳性细胞在肿瘤热点内和热点外的肿瘤组织中的平均比例显著高于周围正常组织。因此，肿瘤组织内的 M2 偏斜巨噬细胞多于肿瘤组织外，表明肿瘤内存在活跃的促肿瘤极化。我们的结果与人类和小鼠肿瘤中报道的结果一致，表明TAM靶向疗法可能代表了犬HSA的可行治疗选择23,62。


在这项研究中，肿瘤热点内和热点外的肿瘤组织中的CD204和CD206阳性细胞比正常周围组织（脾脏、心脏、肝脏、肾脏和肺）多。这一发现支持了这样一种观点，即要么存在分化为巨噬细胞的循环单核细胞的主动募集，要么局部组织驻留的巨噬细胞响应 HSA 的生长而扩增。在肺癌、胰腺癌和胶质母细胞瘤的小鼠模型中，TAMs起源于扩张的组织驻留巨噬细胞和循环单核细胞.11,30,63 Regan等人表明，犬HSA细胞分泌高水平的趋化因子CCL2，刺激单核细胞迁移和募集到转移。48然而，他们没有探索募集的单核细胞对TAM总数的相对贡献，也不能根据我们的结果来确定。


我们发现肿瘤部位之间每HPF（0.078mm2）的CD204阳性或CD206阳性细胞数量没有显着差异，CD206/CD204阳性细胞的比例也没有显着差异。脾脏肿瘤中每个HPF的CD204阳性细胞数量高于心脏和其他器官的肿瘤，但并不显著。了解脾脏或心脏病变是否代表患有 HSA 的狗的原发性肿瘤可能具有挑战性，尤其是在回顾性研究设计中。因此，我们将病变分为心脏、脾脏和其他部位。事实上，在脾脏病变中，每个HPF的CD204阳性细胞数量较高，这是最常报告的原发性肿瘤部位，与转移相比，可能对应于原发肿瘤内TAM的数量更高.4,8鉴于狗的数量很少，该研究可能不足以显示任何此类差异。在一项比较透明细胞肾细胞癌患者中配对原发性和转移性肿瘤样本之间表型差异的研究中报告了类似的结果。39 原发性肿瘤中CD204阳性细胞的数量似乎高于转移瘤。他们还观察到，与转移瘤相比，原发性肿瘤中CD163（人类M2相关标志物）阳性巨噬细胞的比例更高。有趣的是，另一种巨噬细胞标志物离子化钙结合接头分子1（IBA1）阳性细胞的数量显示出相反的模式。另一方面，Withers等人表明，肺转移中CD204阳性巨噬细胞的数量明显高于骨肉瘤狗的原发性肿瘤。61 原发性和转移性病变之间 TAM 数量的这些差异是否是由于肿瘤类型或研究器官之间的生物学差异，仍有待探索。


由于我们的目的是研究未接受过治疗的狗在不同肿瘤部位的巨噬细胞表型，因此我们无法将我们的发现与临床结果联系起来。大多数化学疗法，包括用于治疗患有HSA的狗的化学疗法，都会影响TAM的数量及其表型.9,20,32化学疗法通常会将TAM转向促炎，抗肿瘤M1表型，这可能会改变我们的研究结果。此外，与手术相关的急性应激会影响巨噬细胞表型和 TAM 浸润.26,35,54 手术已被证明会增加原发肿瘤和转移瘤内 TAM 的数量，并使转移靶器官中的 TAM 和巨噬细胞偏向促肿瘤 M2 表型.26,35,54


当将临床分期和组织学参数与 TAM 数和表型进行比较时，核多形性是唯一显示显着相关性的评分。较高的多形性评分与较少的CD204阳性细胞数量相关。然而，只有 2 只患有肿瘤的狗的多形性评分为 0，这使得这一发现的有效性受到质疑。几项研究表明，较高的 TAM 数量与几种人类癌症的不良临床结果相关。62 兽医领域也出现了类似的发现，较高的 TAM 数量与较差的 ST 或较高的组织学等级相关.14,45,50,59 我们的研究结果是否反映了 TAM 数量与患有 HSA 的狗的组织学参数之间几乎没有关联的事实，或者我们的研究是否动力不足尚不清楚。由于大多数 HSA 具有相似的生物学行为，转移广泛且生存率低，因此肿瘤之间的 TAM 数量和表型可能没有任何差异25,46,49。


在过去的十年中，在癌症治疗中靶向TAMs引起了人们的极大兴趣.28,53已经提出了几种策略，包括（1）TAM的消耗，（2）抑制血液单核细胞的募集，或（3）TAM的重编程。基于抑制TAMs募集和耗竭的试验结果令人失望，因此重点似乎正在转向重编程。7 药物 MDP 是最早用于狗的免疫疗法之一.31,57 与单独手术治疗的狗相比，MDP 对患有骨肉瘤和 HSA 的狗具有显着的临床益处。MDP 与巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞和潘氏细胞的细胞内 NOD2 受体结合.24,42 NOD2 结合导致核因子 κB （NF-κB） 通路的激活和促炎细胞因子的下游产生，例如肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素 （IL）-6、IL-8 和 IL-12。这些细胞因子通常与 M1 倾斜的巨噬细胞和改善的杀瘤能力有关。MDP 的临床益处让我们希望，更具选择性的 TAM 靶向免疫疗法可能会在未来提高患有 HSA 的狗的生存率。57


CD206 在各种器官的正常组织驻留巨噬细胞中的表达以前没有在狗身上进行过研究。在肝脏、脾脏和心脏肿瘤周围的正常组织中，组织驻留的巨噬细胞大部分是CD206阴性的。肺中的大多数肺泡和间质巨噬细胞是CD206阳性的。在没有癌症的健康狗中是否也是如此，或者是转移前生态位形成的影响仍未探索。在人类中，健康个体的大多数肺泡巨噬细胞似乎是CD206阳性的，这与我们的发现非常吻合。37 我们还观察到肾皮层中组织驻留的巨噬细胞是 CD206 阳性，但只有 1 只狗有肾转移。


我们的研究有几个可能的局限性。首先，我们没有将来自非癌症患者的组织样本作为对照组，尽管我们将来自同一只狗的健康周围组织作为内部对照。健康周围组织中巨噬细胞的数量和表型可能受到肿瘤的影响，并且在健康狗的生理条件下可能会有所不同。其次，该研究是回顾性的，纳入病例的代表性可以提高。在数据收集过程中还存在遗漏相关临床和组织病理学数据的风险。第三，纳入的狗数量很少，并且存在遗漏不同位置之间 HSA 病变中巨噬细胞数量和表型差异的风险。最后，在单独的载玻片上进行 CD204 和 CD206 免疫组化，而不是使用多重 IHC/免疫荧光等方法，在估计双阳性细胞时会引入一些误差。尽管对连续切片进行染色应导致有限的变异，但无法计算完全相同的区域。


总之，我们已经表明，肿瘤组织中表达 CD206 的 M2 极化巨噬细胞的数量明显高于正常周围组织。这与人类医学的发现一致，并支持TAM具有免疫抑制和促肿瘤作用的观点。我们发现与肿瘤位置相关的巨噬细胞数量或表型没有显着差异。临床分期或组织学参数与 TAM 的数量或表型之间没有关联，除了较高的核多形性评分与较低的 TAM 数量相关。鉴于患有癌症的狗的转化价值，患有HSA的狗可以作为评估旨在重新编程TAM的新疗法的良好模型。

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