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== Materials and Methods ==

=== 研究人群和样本收集 ===

回顾性收集了 2018 年 1 月至 2021 年 12 月期间对私人拥有的、未接受过治疗的患有自然发生的内脏 HSA 的狗进行的所有尸检病例的组织样本，有或没有播散性疾病，回顾性地从挪威生命科学大学临床前科学和病理学系的病理学档案中收集。从病历中获得相应的临床元数据（品种、年龄、性别、药物和合并症）。需要主人的书面同意才能将狗纳入研究。如果狗接受过 HSA 的手术治疗、有隐匿性特应性或过敏性疾病病史、既往或并发肿瘤疾病、目前正在服用免疫调节药物（糖皮质激素或细胞毒性药物）或患有全身炎症性疾病（感染性或免疫介导）。

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=== 尸检 ===

该研究包括17只狗（表1）。所有病例均由兽医病理学家进行了标准的尸检。每只狗都有详细的病理记录，包括所有主要器官系统的完整宏观和组织学描述以及任何异常发现。收集标准器官样本和来自所有肿瘤的样本并固定在 10% 缓冲福尔马林、石蜡包埋中，并在室温下以福尔马林固定石蜡包埋 （FFPE） 块的形式储存。共有27个肿瘤样本，其中13个为原发肿瘤，14个为转移瘤。7例（41.2%）HSA位于1个器官，10例（58.8%）肿瘤位于2个或更多部位。由于并不总是能够确定哪个肿瘤代表原发肿瘤，因此将肿瘤分为脾脏、心脏和其他部位。

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=== 分期和组织学参数 ===
 
苏木精和伊红染色切片由委员会认证的兽医病理学家审查，以确认组织病理学诊断并评估肿瘤的组织学参数。根据 Ogilvie 等人使用的分级系统对组织学参数进行评分 43 简而言之，总体分化评分为 1 到 3，其中 3 分化程度最低，核多形性从 0 到 3,3 分标记为核多形性，坏死量从 0 到 3（在石蜡包埋前修剪肉眼可见的坏死区域后进行组织学评估）， 其中 3 个坏死率超过 50%，有丝分裂数量从 0 到 3，其中 3 个表示每 10 个高功率场 （HPF） 有丝分裂超过 30 个（400 倍，相当于总面积 2.37 mm2）。计算总分，0-5 分为 1,6-9 分为 2 级，10-12 分为 3 级。根据先前建立的分期方案，回顾性地使用尸检报告为每个病例分配从I到III的临床分期（表2）。58

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